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        組織搗碎勻漿機關于組織勻漿的制備講解

        更新時間:2018-11-24      點擊次數:3695
           組織搗碎勻漿機關于組織勻漿的制備講解
          1.取組織塊(0.2g-1g)少可到2-5mg,在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,放入5或10ml的小燒杯內
          2.用移液管量取預冷的勻漿介質或者用0.86%冷生理鹽水,勻漿介質或生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質或生理鹽水于燒杯中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。
          3.勻漿的方式有多種:手工勻漿、機器(JJ-2組織搗碎勻漿機)勻漿、超聲勻漿、反復凍融。
          手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊,一起倒入勻漿管中進行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,上下轉動研磨數十次(6-8分鐘),充分研碎,使組織勻漿化。
          機器勻漿:用JJ-2組織搗碎勻漿機研磨制成10%組織勻漿,也可用內切式組織勻漿機制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,連續3-5次,在冰水中進行),皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
          超聲粉碎:用超聲粉碎機進行粉碎,可用超聲波發生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎。
          反復凍融:培養或者分離的細胞可以用以上的方法勻漿,也可以反復凍溶3次左右(即讓細胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結冰,溶解,再結冰,再溶解,反復3次左右),但有部分酶活力會受影響。
          取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可),顯微鏡下觀察細胞是否磨破,若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數。
          4.將制備好的10%勻漿用普通離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心10-15分鐘,若檢測ATP酶,則只需要1000轉/分,離心5分鐘,將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。
          根據實驗需要,取適量上清液進行各種測定。
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